《糧油檢驗 油料油脂中黃曲霉毒素B1的測定 熒光定量快速檢測法》行業標準征求意見

　　【儀表網 行業標準】國家糧食和物資儲備局組織起草的《糧油檢驗 油料油脂中黃曲霉毒素B1的測定 熒光定量快速檢測法》行業標準已形成征求意見稿，現向社會公開征求意見，截止日期為2024年2月8日。
 

　　黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉等在生長繁殖過程中產生的次生有毒代謝產物，是雙呋喃環類毒素，其衍生物有約 20 種，主要是 B1、B2、G1、G2、M1、M2 等。黃曲霉毒素被世界衛生組織癌癥研究機構劃定為一類天然存在的致癌物，其中以 B1 的毒性最大，致癌性最強。糧食和植物油料均會受到黃曲霉毒素的污染，尤其是花生和玉米更容易被污染。在花生油和玉米油的生產中，原料花生仁和玉米胚中的黃曲霉毒素會轉移至花生油、玉米油和花生餅粕、玉米餅粕中，對食用油脂和飼料餅粕的質量安全造成威脅。GB 2761-2017《食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》中對花生和玉米胚及其油脂中 AFB1 做出≤20µg/kg 限量要求。
 

　　GB 5009.22-2016《食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素 B 族和 G 族的測定》中列出了 5 種檢測方法，即第一法同位素稀釋液相色譜-串聯質譜法，第二法高效液相色譜-柱前衍生法，第三法高效液相色譜-柱后衍生法，第四法酶聯免疫吸附篩查法，第五法為薄層色譜法。其中的高效液相色譜法、酶聯免疫吸附法以高靈敏度、精密度和便于自動化而被應用于油脂企業。然而，高效液相色譜法檢測成本高，儀器價格高，維護費用高，分析時間長，前處理復雜；酶聯免疫吸附法雖然在檢測成本上略好，但準確性和重現性卻有待提高。
 

　　近年來，黃曲霉毒素 B1 快速檢測方法已在油脂生產企業廣泛使用，它具有操作簡單、樣品用量少、測定速度快、重現性好、結果可靠等特點，尤其在油料、油脂、餅粕的日常生產檢驗，特別是其高密度檢測中顯現更大的優勢。并且，黃曲霉毒素 B1 快檢法也已普遍應用于糧食和飼料領域，并出臺了多個行業標準和地方標準，包括：LS/T 6111-2015 《糧油檢驗 糧食中黃曲霉毒素 B1 測定 膠體金快速定量法》，NY/T 2550-2014 《飼料中黃曲霉毒素 B1 的測定 膠體金法》，DB36/T 1024-2018 《飼料中黃曲霉毒素的快速篩查 膠體金快速定量法》。因此，從生產實際出發，油料油脂領域也需要把黃曲霉毒素 B1 快檢法提升為標準方法，并加以推廣應用，為食用植物油生產中 AFB1 實時檢測和監控提供支持。此外，糧食和飼料所采用的快檢標準方法多為膠體金法，膠體金法只能實現定性和半定量，而熒光定量法能夠實現指標定量的快速檢測，能夠更精準的對黃曲霉毒素進行監控。因此制定油料油脂生產中黃曲霉毒素 B1 熒光定量快速檢測方法是非常必要的，對可靠監控油料油脂生產中黃曲霉毒素 B1 風險、實現糧油行業的高質量發展具有重要意義。
 

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件起草單位：河南工業大學，費縣中糧油脂工業有限公司，中糧油脂控股有限公司，河北玉星食品有限公司，長壽花食品股份有限公司。
 

　　本文件規定了黃曲霉毒素B1的熒光定量快速檢測方法的原理、試劑、儀器設備及材料、樣品制備、樣品測定、結果判定和檢測限。本文件適用于花生仁、玉米胚等油料及其油脂和餅粕中黃曲霉毒素B1的快速檢測。
 

　　原理：
 

　　采用熒光側向免疫層析方法學原理，將待測樣品滴加在加樣區，樣品中的黃曲霉毒素B1與結合墊中的熒光微球標記黃曲霉毒素B1抗體結合并通過毛細作用向前層析，達到檢測區后，檢測線T線上固定的黃曲霉毒素B1抗原與剩余未結合的熒光微球標記黃曲霉毒素B1抗體結合。檢測線T線上結合的熒光微球標記黃曲霉毒素B1抗體的量與樣品中黃曲霉毒素B1的濃度成反比。層析結束后，采用熒光定量快速檢測儀讀取T線和C線的熒光強度并計算T/C值，通過儀器內置的標準曲線即可計算出樣品中黃曲霉毒素B1的含量并判斷陰陽性。
 

　　儀器設備及材料：
 

　　實驗室常規儀器、設備及材料。
 

　　1.粉碎機：可使試樣粉碎后全部通過20目標準篩。
 

　　2.天平：分度值 0.01g。
 

　　3.漩渦振蕩器。
 

　　4.黃曲霉毒素 B1熒光定量快速檢測卡(2)：具體儲存條件參照使用說明。
 

　　5.離心機。
 

　　6.恒溫孵育器：孵育溫度 37℃，工作條件：環境溫度 5-37℃，環境濕度不大于80%。
 

　　7.熒光定量快速檢測儀(3)：工作條件：環境溫度 5-40℃，環境濕度不大于 90%。
 

　　8.ID 卡。
 

　　9.條形碼。
 

　　樣品測定：
 

　　1.檢測前準備
 

　　1.1 將待用黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測卡、樣品提取液、樣品稀釋液恢復至室溫。
 

　　1.2 將檢測卡恒溫孵育器開機，待溫度升至37℃后即可使用。
 

　　1.3 將熒光定量快速檢測儀開機，預熱10min，插入本批次產品所對應的ID卡(每批次產品只需插一次即可)，如需切換檢測項目，掃描相應項目和批次的條形碼即可。
 

　　2.樣品檢測
 

　　2.1 從包裝袋中取出黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測卡，水平置于檢測卡恒溫孵育器上。
 

　　2.2 用移液槍吸取稀釋后的待測液100ul加到檢測卡上的加樣孔中，開始計時孵育8min。
 

　　2.3 孵育結束后，將檢測卡插入熒光定量快速檢測儀中，按讀數鍵或觸摸屏幕讀數即可。
 

　　結果判定：
 

　　1.定量檢測結果將呈現于熒光定量快速檢測儀液晶顯示屏上，同時可按打印鍵打印獲得紙質的檢測報告(平行測定次數可根據使用方質量控制要求進行調整，定量檢測結果保留2位小數)。
 

　　2.陰性(-)：檢測結果

　　3.陽性(+)：檢測結果≥cut-off值(可根據使用方質量控制要求進行調整)。
 

　　4.無效：檢測儀報錯，則本次檢測無效，需重新測試。
 

　　5.檢測結果超出定量范圍的上限，可取離心后的上清液(6.2.4)，用樣品提取液稀釋5倍后混勻，再按(6.2.5)檢測，檢測結果乘以5，即為樣品中黃曲霉毒素B1的最終含量。
 

　　更多詳情請見附件。