非洲豬瘟檢測(cè)儀怎么用?新手易踩的坑有哪些?

　　【BK-PCR16D】山東博科儀器以客戶為中心，以服務(wù)為宗旨，以創(chuàng)新為動(dòng)力。

　　對(duì)于初次接觸非洲豬瘟檢測(cè)儀的新手而言，掌握基本操作流程只是基礎(chǔ)，更重要的是避開操作中的常見誤區(qū)，這些“坑”往往是導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的主要原因。結(jié)合基層檢測(cè)實(shí)踐，新手使用儀器時(shí)需重點(diǎn)關(guān)注樣本處理、試劑操作、儀器設(shè)置三個(gè)環(huán)節(jié)的常見問題。

　　樣本處理環(huán)節(jié)最易出現(xiàn)“樣本選取不當(dāng)”和“核酸提取不規(guī)范”的問題。新手常錯(cuò)誤地選擇病變不明顯的樣本，如僅采集生豬的糞便樣本檢測(cè)非洲豬瘟，而糞便中病毒含量低且易受雜質(zhì)干擾，正確的做法是優(yōu)先選擇血液、脾臟等病毒含量高的樣本。核酸提取時(shí)，新手常因離心時(shí)間不足(低于3分鐘)或試劑添加順序錯(cuò)誤，導(dǎo)致核酸提取不，建議嚴(yán)格按照試劑盒說明書步驟操作，提取完成后可通過紫外分光光度計(jì)檢測(cè)核酸純度，確保OD260/OD280值在1.8-2.0之間。

　　試劑操作環(huán)節(jié)的核心誤區(qū)是“污染防控不到位”和“體系配制不準(zhǔn)確”。PCR檢測(cè)對(duì)污染極其敏感，新手常忽視“分區(qū)操作”原則，在同一區(qū)域完成試劑準(zhǔn)備、樣本處理和擴(kuò)增檢測(cè)，導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物污染試劑，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。正確的做法是劃分獨(dú)立的試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和擴(kuò)增區(qū)，各區(qū)使用專用的移液器和耗材，操作時(shí)穿戴一次性手套并及時(shí)更換。體系配制時(shí)，新手常因移液器操作不熟練導(dǎo)致試劑加樣量偏差，建議使用量程匹配的移液器(如加樣量5μL時(shí)使用10μL移液器)，加樣前先吸打試劑3次潤洗吸頭，確保移液準(zhǔn)確。

　　儀器設(shè)置和結(jié)果判讀環(huán)節(jié)易出現(xiàn)“程序參數(shù)錯(cuò)誤”和“結(jié)果解讀片面”的問題。不同廠家的PCR試劑對(duì)應(yīng)的退火溫度、延伸時(shí)間不同，新手常直接使用儀器默認(rèn)程序，未根據(jù)試劑說明書調(diào)整參數(shù)，導(dǎo)致擴(kuò)增效率低。例如，某品牌試劑要求退火溫度為60℃，若使用默認(rèn)的55℃程序，會(huì)導(dǎo)致引物非特異性結(jié)合，出現(xiàn)假陽性。檢測(cè)完成后，新手常僅根據(jù)CT值判斷結(jié)果，忽視擴(kuò)增曲線形態(tài)，若曲線出現(xiàn)非典型“S”型(如平臺(tái)期不明顯)，可能是樣本污染或試劑失效導(dǎo)致，需重新檢測(cè)。