一、代理介紹
農(nóng)桿菌感受態(tài)制備試劑盒代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司，提供多個品牌的農(nóng)桿菌感受態(tài)制備試劑盒，更多產(chǎn)品的介紹，歡迎咨詢！
二、產(chǎn)品介紹
1. 農(nóng)桿菌感受態(tài)制備技術(shù)演進
技術(shù)代際 | 方法 | 轉(zhuǎn)化效率 | 特點 |
Di一代（1980s） | 氯化鈣化學(xué)法 | 10?–10? CFU/μg | 操作簡便，效率有限 |
第二代（1990s） | 電穿孔法 | 10?–10? CFU/μg | 需要專用設(shè)備，細胞損傷大 |
第三代（2000s） | 液氮速凍/凍融法 | 10?–10? CFU/μg | 適合大質(zhì)粒，重復(fù)性挑戰(zhàn) |
第四代（2010s+） | 優(yōu)化化學(xué)法+凍干保護 | 10?–10? CFU/μg | 高活性、長期穩(wěn)定、標(biāo)準(zhǔn)化 |
2. 核心產(chǎn)品系列詳解
2.1 經(jīng)典化學(xué)法制備試劑盒
產(chǎn)品名稱：AgroCompetent™ Chemically Competent Cell Prep Kit
參數(shù) | 規(guī)格 |
制備原理 | 低滲CaCl?/MgCl?處理+PEG輔助細胞膜重塑 |
適用菌株 | GV3101、EHA105、LBA4404、AGL1等常用根癌農(nóng)桿菌 |
起始材料 | 新鮮過夜培養(yǎng)物或甘油保藏菌 |
制備規(guī)模 | 50 mL培養(yǎng)物→200管（50 μL/管）感受態(tài) |
轉(zhuǎn)化效率 | ≥1×10? CFU/μg pCAMBIA1301質(zhì)粒DNA |
有效期 | -80°C保存6個月，轉(zhuǎn)化效率下降<20% |
試劑盒組成
組分 | 規(guī)格 | 功能 |
Solution I（洗滌緩沖液） | 100 mL | 低滲處理，去除培養(yǎng)基殘留 |
Solution II（感受態(tài)緩沖液） | 50 mL | CaCl?/MgCl?/PEG zui-you化配方 |
Solution III（凍存保護液） | 25 mL | 含7.5% DMSO，玻璃化保護 |
陽性對照質(zhì)粒 | 10 μL (50 ng/μL) | pCAMBIA1301（卡那+潮霉素抗性） |
使用說明書 | 1份 | 詳細protocol與故障排除 |
優(yōu)化技術(shù)要點
關(guān)鍵步驟 | 技術(shù)細節(jié) | 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) |
菌體收集時機 | OD???=0.4–0.6（對數(shù)早期） | 細胞活力zui-jia，細胞壁可塑性強 |
低溫處理 | 全程0–4°C操作 | 抑制代謝，維持膜穩(wěn)定性 |
滲透壓梯度 | 逐步降低離子強度 | 避免滲透休克導(dǎo)致細胞裂解 |
DMSO處理 | 終濃度7.5%，分步加入 | 平衡細胞膜流動性與毒性 |
分裝凍存 | 液氮速凍后-80°C保存 | 避免冰晶損傷，玻璃態(tài)固化 |
2.2 高效電轉(zhuǎn)感受態(tài)制備試劑盒
產(chǎn)品名稱：AgroCompetent™ Electrocompetent Cell Prep Kit
參數(shù) | 規(guī)格 |
制備原理 | 高滲蔗糖/甘油洗滌+超純水電滲透處理 |
適用菌株 | 農(nóng)桿菌及難以制備感受態(tài)的革蘭氏陰性菌 |
轉(zhuǎn)化效率 | ≥5×10? CFU/μg pCAMBIA1301（電轉(zhuǎn)條件優(yōu)化后） |
電轉(zhuǎn)參數(shù) | 2.0 kV, 25 μF, 200 Ω（0.2 cm電轉(zhuǎn)杯） |
細胞濃度 | 1–2×1011 CFU/mL（濃縮10倍） |
技術(shù)突破
創(chuàng)新點 | 效果 |
多步洗滌純化 | 去除外膜脂多糖，降低電轉(zhuǎn)脈沖阻抗 |
超純水電滲透 | 瞬時水通道形成，DNA高效攝入 |
高滲恢復(fù)培養(yǎng) | 電轉(zhuǎn)后立即SOC-Mg2?高滲恢復(fù)，存活率提升3倍 |
無抗生素篩選 | 電轉(zhuǎn)后4小時表達窗口，避免質(zhì)粒丟失 |
2.3 發(fā)根農(nóng)桿菌專用試劑盒
產(chǎn)品名稱：RhizoCompetent™ Hairy Root Transformation Kit
特性 | 說明 |
適用菌株 | Arqua1、ATCC 15834、K599、MSU440等 |
特殊優(yōu)化 | 針對Ri質(zhì)粒（pRi）的Vir基因誘導(dǎo)優(yōu)化 |
誘導(dǎo)化合物 | 含100 μM乙酰丁香酮（AS）預(yù)處理模塊 |
轉(zhuǎn)化效率 | ≥5×10? CFU/μg（pCAMBIA2301-GFP） |
應(yīng)用方向 | 藥用植物毛狀根培養(yǎng)、代謝工程、根系發(fā)育研究 |
發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化特色
對比項 | 根癌農(nóng)桿菌 | 發(fā)根農(nóng)桿菌 |
致瘤質(zhì)粒 | Ti質(zhì)粒（tumor-inducing） | Ri質(zhì)粒（root-inducing） |
T-DNA來源 | 左右邊界（LB/RB）之間 | TL-DNA + TR-DNA（雙T-DNA） |
植物表型 | 冠癭瘤（undifferentiated） | 毛狀根（hairy root, hormone-free growth） |
應(yīng)用優(yōu)勢 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)化、可再生植株 | 快速生長、高代謝物產(chǎn)量、根系特異性表達 |
2.4 即用型感受態(tài)細胞（Ready-to-Use）
產(chǎn)品系列：AgroInstant™ Pre-made Competent Cells
產(chǎn)品編號 | 菌株背景 | 抗性標(biāo)記 | 特色應(yīng)用 |
AI-GV3101 | C58C1 Rif? | Rif?, Gent? | 擬南芥轉(zhuǎn)化金標(biāo)準(zhǔn) |
AI-EHA105 | C58C1 Rif? | Rif? | 單子葉植物高效轉(zhuǎn)化 |
AI-LBA4404 | Ach5 | Rif?, Str? | 安全性高（disarmed Ti） |
AI-AGL1 | C58 Rec? | Rif?, Carb? | 大片段（>150 kb）轉(zhuǎn)移 |
AI-GV3101(pSoup) | 含pSoup輔助質(zhì)粒 | Rif?, Gent?, Tet? | pGreen/pSoup雙元系統(tǒng) |
AI-EHA101 | C58C1 Rif? | Rif?, Carb? | 超級Vir突變體 |
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
檢測項目 | 合格標(biāo)準(zhǔn) | 檢測方法 |
轉(zhuǎn)化效率 | ≥1×10? CFU/μg（GV3101/EHA105） | 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實驗 |
無菌檢測 | 無細菌/真菌污染 | LB平板培養(yǎng)48h |
質(zhì)粒穩(wěn)定性 | 無輔助質(zhì)粒丟失 | 選擇性平板驗證 |
細胞活力 | >90%（臺盼藍染色） | 顯微鏡計數(shù) |
批次一致性 | CV<15% | 至少3批次驗證 |
三、代理公司介紹
農(nóng)桿菌感受態(tài)制備試劑盒代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司，公司產(chǎn)品線涉及細胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、 細胞生物學(xué)等多個方向，專注于生命科學(xué)試劑、耗材、細胞、儀器等產(chǎn)品銷售，經(jīng)營的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、Elabscience、GeneTex、Gentaur、immunostar、Invitrogen、invivogen、Kerafast、Coriell、ATCC、SSI-DIAGNOSTICA、凱杰、RD systems等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價美的產(chǎn)品、及時到位的服務(wù)，努力成長為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。
